一、服務(wù)簡介

      Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法。對已知表達(dá)蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測，對新基因的表達(dá)產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。 與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。

      經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

二、技術(shù)流程

1、提取細(xì)胞或組織蛋白、并進(jìn)行蛋白含量；

2、制備SDS-PAGE膠；

3、蛋白樣品變性、電泳；

4、電泳轉(zhuǎn)膜；

4、封閉；

5、加一抗，TBST洗滌；

6、HRP標(biāo)記的二抗BST洗滌；

7、ECL試劑作用；

8、X-光片曝光、顯影或化學(xué)發(fā)光；

9、結(jié)果分析

1、組織樣本

  需要量：每個樣本至少100mg；

  運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸

2、細(xì)胞樣本

  需要量：每個檢測樣本需提供至少5*10^5細(xì)胞量（可做3條帶）；

  運(yùn)輸：25T細(xì)胞培養(yǎng)瓶，灌滿培養(yǎng)基新鮮運(yùn)輸或提供細(xì)胞凍存管，干冰運(yùn)輸       

3、提好的蛋白

  運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸

4、一抗

  運(yùn)輸：依據(jù)說明書，一般4℃或-20℃運(yùn)輸，嚴(yán)禁反復(fù)凍融

5、蛋白定量結(jié)果（見交付實(shí)驗(yàn)報(bào)告或者交付的Excel）；

6、灰度值分析結(jié)果（Excel ）；

7、膜電泳曝光圖（jpg/png/ppt）

五、詢價(jià)及訂購

感謝您選擇我公司的western-blot檢測服務(wù)。如有相關(guān)問題請聯(lián)系我們的工作人員。